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生活污水與工業(yè)廢水含有大量有機物，這些有機物在水體中分解時要消耗大量溶解氧，從而破壞水體中氧的平衡，使水質惡化。 生化需氧量是屬于利用水中有機物在一定條件下所消耗的氧，用來表示水體中有機物的含量的一個重要指標。 生化需氧量的經典測定方法，是稀釋接種法。 稀釋接種法： 1、方法原理 生化需氧量是指在一定條件下，微生物分解存在水中的某些可氧化物質、特別是有機物所進行的生物化學過程消耗溶解氧的量。 于恒溫培養(yǎng)箱內在20℃±1℃培養(yǎng)5天，分別測定樣品培養(yǎng)前后的溶解氧，二者之差即為BOD5值，以氧的mg/L表示。 本方法適用于測定BOD5范圍：2mg/L＜C BOD5＜6000mg/L，當＞6000時，會因稀釋帶來誤差。 儀器： （1）恒溫培養(yǎng)箱 （2）5—20L細口玻璃瓶 （3）1000—2000ml量筒 （4）玻璃棒：50ml，棒的底端固定一個10號的帶有幾個小孔的橡膠塞。 （5）溶解氧瓶（碘量瓶）：250—300ml 試劑： （1）磷酸鹽緩沖溶液 將8.5g磷酸二氫鉀（KH2PO4），21.75g磷酸氫二鉀（K2HPO4），33.4g七水合磷酸氫二鈉（Na2HPO4·7H2O），和1.7g氯化銨（NH4Cl）溶于水中，稀至1000ml。此溶液PH值為7.2。 （2）硫酸鎂溶液 將22.5g七水合硫酸鎂（MgSO4·7H2O）溶于水中，稀至1000ml。 （3）氯化鈣溶液 將27.5g無水氯化鈣溶于水中，稀至1000ml。 （4）氯化鐵溶液 將0.25g六水合氯化鐵（FeCl3·6H2O）溶于水，稀至1000ml。 （5）鹽酸溶液（0.5mol/L） 將40ml濃鹽酸溶于水， 稀至1000ml。 （6）氫氧化鈉溶液（0.5mol/L） 將20g氫氧化鈉溶于水，稀至1000ml。 （7）葡萄糖—谷氨酸標準溶液 將葡萄糖和谷氨酸在103干燥1小時后，各稱取150mg溶于水中，移入1000ml容量瓶中稀至標線，臨用前配制。 （8）稀釋水 在5—20L玻璃瓶中裝入一定量的水，控制水溫在20℃左右，用曝氣機曝氣2-8小時，使稀釋水中的溶解氧接近飽和。瓶口蓋以兩層紗布，置于20℃培養(yǎng)箱內放置數(shù)小時，使水中溶解氧含量達到8mg/L左右。臨用前向每升水中加入氯化鈣、硫酸鎂、氯化鐵、磷酸緩沖液各1ml，混勻。 （9）接種液可選用以下幾種： ①一般生活用水，放置一晝夜，取上清液。 ②表層土壤水，取100g花園或植物生長土壤，加1升水，靜置10分鐘，取上清液。 ③污水廠出水 ④含有城市污水的河水或湖水 （10）接種稀釋水 每升稀釋水中接種的加入量：生活污水1-10ml；表層土壤水20-30ml；河水或湖水10-100ml。 接種稀釋水pH值為7.2，配制后應立即使用。 2、水樣的測定 （1）不經稀釋的水樣的測定 ①將混勻水樣轉移入兩個溶解氧瓶中（轉移中不要出現(xiàn)氣泡），溢出少許，加塞。瓶內不應留氣泡。 ②其中一瓶隨即測定溶解氧，另一瓶口水封后放入培養(yǎng)箱，在20±1℃下培養(yǎng)5天。 ③5天后，測定溶解氧。 ④計算： -水樣在培養(yǎng)前的溶解氧濃度 -水樣在培養(yǎng)后的溶解氧濃度 經稀釋水樣的測定： 一般稀釋法 ①按選定的稀釋比例，在1000ml量筒內引入部分稀釋水； ②加入需要量的混勻水樣，再引入稀釋水（或接種稀釋水）至800ml； ③用帶膠板的玻璃棒上下攪勻。攪拌時膠板不要露出水面，防止產生氣泡； ④將水樣裝入兩個溶解氧瓶內，測定當天溶解氧和培養(yǎng)5天后的溶解氧。 ⑤稀釋水同樣培養(yǎng)作空白實驗，測定5天前后的溶解氧。 注意事項： （1）水樣pH值應在6.5-7.5范圍內，若超出可用鹽酸或氫氧化鈉調節(jié)pH近于7。 （2）水樣在采集和保存及操作過程中不要出現(xiàn)氣泡 （3）水樣稀釋倍數(shù)超過100時，要預先在容量瓶中用蒸餾水稀釋，再取適量進行稀釋培養(yǎng)。 （4）檢查稀釋水和接種液的質量和化驗人員的水平，可將20ml葡萄糖-谷氨酸標液用稀釋水稀至1000ml，按BOD的步驟操作，測得的值應在180-230mg/L之間，否則，應找出原因所在。 （5）在培養(yǎng)過程中注意及時添加封口水。
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